王琳1989年考入上海戏剧学院表演系，1990年被公派到俄罗斯莫斯科国立影戏学院留学，学成归来后起头演艺生活生计。
1993年，拍摄了第一部电视剧《情满珠江》，在剧中饰张越美，该剧获第14届中国电视剧飞天奖长篇连续剧一等奖，第12届中国电视金鹰奖优异长篇连续剧，拍完该剧以后息影几年。
1995年，复出与史戈、张晓林主演农人题材励志剧《乡间人城里人本国人》饰梦霞。
1998年，与何冰、傅彪配合出演滕华|执导的感情剧《找不着北》。
1999年，与赵有亮、曹翠芬主演感情剧《难舍真情》饰女主角麦小文。该剧获得辽宁省第十四届优异电视剧长篇电视连续剧一等奖，提名第19届中国电视金鹰奖长篇电视剧奖。
2001年，在赵薇、古巨基、林心如主演的琼瑶剧《情深深雨蒙蒙》中饰雪姨，被观众所熟知。
2002年，在陆毅、蒋虹主演的都市感情剧《一网情深》中饰渐渐。在六小龄童、任天野主演的恋爱剧《某年某月某一天》中饰江九月。
2003年，主演家庭感情剧《心不在遥远》饰朱子旋。与李幼斌、胡亚捷主演警匪剧《法不容情》饰乔茵。与陈建斌、李洪涛主演电视剧《走进八里堡》饰苏改凤。
2004年，在刘若英、赵文u主演讲述张爱玲平生的电视剧《上海旧事》中饰孙用藩。在袁立、胡兵主演的恋爱剧《啼笑人缘》中饰雅琴。与宋丹丹主演讲述两个中年女人情感故事的电视剧《空屋子》。
2006年，在张家辉、蔡琳、乔振宇主演的古装恋爱轻笑剧《新醉打金枝》中饰贵重妃。
2007年，在周一围、杨雪、宋佳主演的感情剧《真情无穷之继母》中饰苗芳。与黄海波、姚芊羽、杨幂主演婚恋伦理剧《笑着活下去》饰徐丽然。在李安执导，梁朝伟、汤唯主演的影戏《色戒》中饰廖太太。
2008年，与高昊、陶慧敏主演恋爱伦理剧《情之债》饰丛雅芬。
2009年，与王姬、李勤勤主演当代都市生存感情剧《五十玫瑰》饰方菲。
2010年，在霍建华、吕一、陈思成主演的年月感情剧《新一剪梅》中饰彪悍的牧场老板娘刑孀妇。在杨幂、李东学主演的民国恋爱剧《刁蛮新娘》中饰戴家医生人方德馨。与吕一、孙松主演年月亲情剧《爸爸别走》饰江晓燕。
2011年，与张临、刘涛主演感情剧《告知我你爱我》饰黄雨薇。在冯远征、余少群主演的年月悬疑感情大戏《百花深处》中饰苏柔佳。在林心如、霍建华主演的古装宫斗剧《倾世皇妃》中饰韩昭仪。在蒋梦婕、乔振宇主演的民国恋爱剧《被遗弃的奥秘》中饰张若兰。
2012年，在袁姗姗、杜淳主演的当代宫庭剧《宫锁珠帘》中饰辛者库姑姑盼春。在刘恺威、戴娇倩主演的民国年月剧《狼烟儿女情》中饰冯嘉丽。在李沁、林申主演的感情伦理剧《守望的天空》中饰墨慧雅。
主演家庭伦理剧《有爱就有家》饰沈雪。在吴秀波、海清、张嘉译主演的当代医疗题材剧《心术》中饰孤美人。在袁姗姗、刘恺威主演的古装恋爱剧《美人无泪》中饰赛琪雅。在张博、贾青主演的都市励志剧《迦说男腋Ｉ活》中饰刘琳。
2013年，与李念、郑恺主演都市恋爱剧《爱的秘籍》饰杨洁。与何晟铭、白冰主演今世都市剧《婚前和谈》饰杨小庭。在刘恺威、茅子俊主演的动作奇幻剧《画皮之真爱无悔》中饰青夫人。在霍思燕、张晓龙、陈紫函主演的都市感情励志轻笑剧《爱人情前谁怕谁》中饰余母。在蒋梦婕、阚清子主演的都市时尚感情励志《一克拉胡想》中饰周品缇。在郭敬明执导的影戏《小期间》和《小期间：青木期间》中饰叶传萍。12月在首届“全民奥斯卡·中国UGC传布大奖”中，由热心网友建造的“雪姨开门”视频让“雪姨”王琳获得了年度“最好表情奖”。
2014年，在袁姗姗、陆毅主演的古装宫斗剧《宫锁连城》中饰映月。在韩雪、刘恩佑主演近代都市剧《淑女之家》中饰方柔枝。
2014年，在潘粤明、俞灏明、刘雨欣主演的大型当代家庭伦理剧《几多爱能够重来》中饰演乌梅。
2015年，王琳别离加入了东方卫视明星真人秀观光节目《花样姐姐》和江苏卫视《星厨驾到》第二季明星美食竞技真人秀节目。8月，电视剧《花开如梦》在上海热拍，王琳别离饰演慧和娴的中年期间。